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支原体PCR检测试剂盒的操作步骤
发布日期：
2017-01-06
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3150
支原体PCR检测试剂盒中含有PCR反应所需要各种试剂组分，如：引物、dNTPs、缓冲液、Taq酶、稳定剂等。PCR反应液中加入检测样品和Taq酶，即可进行PCR扩增反应。PCR扩增产物经琼脂糖电泳染色判断，阳性样本将在290bp处出现特异性条带。
1.收取待检样品（贴壁细胞：细胞生长至80％左右即可，送检细胞不能用消化液消化细胞，可以使用细胞刮刀刮取细胞；悬浮细胞：细胞生长至80％左右即可），取150ul（约1～3×105细胞数）至离心管，沸水浴10min 。
2.将煮沸过的细胞悬浮液12000rpm离心2-5min。
3.取上清4ul作为PCR反应模板。
4.充分融化PCR反应液，按下列表格配制反应混合液，并以21ul/管分装至PCR反应管中。
5.每个PCR反应管中加入处理好的样品4ul,DNA阳性对照和阴性对照各加入4ul/管。
6.将所有PCR反应管放入PCR仪，参照以下参数运行PCR仪。
7. 取5ul PCR扩增产物，在1%琼脂糖凝胶上直接点样（注：无需再加溴酚蓝，扩增产物已包含溴酚蓝），120V电泳20分钟（可根据电泳仪的情况，适当调整参数）。
8. EB染色观察。
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