您的位置：
网站首页 >
技术文章 > 游离DNA提取试剂盒的操作步骤
游离DNA提取试剂盒的操作步骤
发布日期：
2018-04-20
浏览人气：
3970
游离DNA提取试剂盒专为从血清或是血浆中提取游离循环DNA而设计，该试剂盒根据样品量分为200μl样品的小提试剂盒以及适用样品量为1ml,2ml,2.5ml,5ml大提试剂盒。所用样品为新鲜血浆或是血清样品，-80℃的冻存样品也适用但不能反复冻融。试剂盒可有效结合血浆及血清中浓度低至50pg/ml的游离DNA片段，由于该试剂盒zui后洗脱体积可低至20μl，这一特性使试剂盒具有浓缩提取低浓度游离DNA片段的作用。提取得到DNA片段既可直接用PCR扩增，qPCR测定，二代测序（NGS）等下游分子操作，也可置于-20℃储存备用。游离DNA提取试剂盒的操作步骤
1. 请自行准备：无水乙醇、1.5mL离心管。
2. 取出洗涤液，按以下操作：
a) 洗涤液A：21mL加入9mL无水乙醇；42mL加入18mL无水乙醇。 b) 洗涤液B：9mL加入21mL无水乙醇；18mL加入42mL无水乙醇。 c) 配制好的洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。
3. 取1.5mL离心管，加入200μL样本，4μLDNA Carrier混合均匀，加入300μL 裂解液及20μL 消化液，振荡混匀，56℃水浴10 分钟。
4. 加入1000μL无水乙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响DNA的提取与后续实验。
5. 将吸附柱放入收集管内，将760μL上述溶液转入吸附柱内，静置2 分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液；
6. 将吸附柱放回收集管内，将剩余760μL溶液转移至吸附柱内，重复步骤5。
7. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液A至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。
8. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液B至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。
9. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，离去残留的洗涤液。
10. 取出吸附柱，放入新的1.5 mL 离心管内，加入30-50 μL 洗脱液，静置3 分钟，12,000 rpm 4℃ 离心2 分钟，收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。
地址：上海市徐汇区宜山路425号光启城22楼
手机：15800446246
邮箱：difabio@163.com
传真：021-64182125
