酶联免疫吸附实验用于标记抗体或抗抗体的酶须具有下列特性：有高度的活性和敏感性，在室温下稳定反应产物易于显现，能商品化生产。如今应用较多的有辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，其中以HRP应用*。
酶联免疫吸附实验检测抗原的方法有以下三点：
1、双抗体夹心法
属于非竞争结合，检测抗原常用的方法，检测含有至少两个抗原决定簇的多价抗原。原理是先将特异性抗体与固相载体连接;加入待测标本，形成固相抗原抗体复合物;再加入酶标抗体形成双抗体夹心，洗涤;加底物显色，根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量检测。
2、双位点一步法
针对抗原分子上两个不同且空间距离较远的决定簇，包被使用一种单抗，酶标记使用另一种单抗。测定时将待测抗原和酶标抗体同时加入，温育、洗涤，加入底物显色。若待测抗原浓度过高时，过量的抗原可分别同固相抗体和酶标抗体结合而抑制夹心复合物的形成，出现钩状效应，显色降低，甚至假阴性。必要时可将标本经过适当稀释后重复测定。
3、竞争法
用于测定小分子抗原，如药物、激素等。原理为先用抗小分子的特异性抗体包被固相，然后同时加入待测样本和酶标记的小分子，两种小分子竞争与固相上的抗小分子的特异性抗体结合，温育一定时间后洗涤，加入酶底物显色。
特点：
①酶标记抗原与样品或标准品中的非标记抗原具有相同的与固相抗体结合的能力；
②反应体系中，固相抗体和酶标抗原是固定*，且前者的结合位点少于酶标记和非标记抗原的分子数量和；
③免疫反应后，结合于固相载体上复合物中被测定的酶标抗原的量(酶活性)与样品或标准品中非标记抗原的浓度成反比。
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