cDNA文库构建是指某生物某发育时期所转录的全部mRNA经反转录形成的cDNA片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。
一、SuperscriptII—RT合成第一链
1.在一RNase-free的0.2mlPCR管中加入xulmRNA(大约500ng)、1ulXhoIPrimer(1.4ug/ul)、
(5’GAGAGAGAGAGAGAGAGAGAACTAGTCTCGAGTTTTTTTTTTTTTTTTTT…3’)、11-xulRNase-freewater）
说明：大于500ngmRNA分n管(500ng/tube)合成第一链，第一链合成完毕后将n管合成一管进行第二链合成。
2.混匀后，70℃反应10分钟。
3.反应完成后，立刻将反应体系置于冰上5min。
4.稍微离心一下，顺序加入以下试剂：
（1）4ul5×firststrandbuffer
（2）2ul0.1MDTT
（3）1ul10mMdNTP(自己配制)
cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多，能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说，从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同，基因组DNA文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因，而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA。
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