1）       总RNA提取

       2）       已知序列的验证：根据客户提供的已知序列设计引物，以总RNA为模板进行RT-PCR扩增，验证参考序列的存在及方向。

       3）       5’和3’RACE

               a）       RNA的去磷酸化处理

               b）       RNA的3’末端处理；RNA的5’末端处理

               c）       cDNA的合成

               d）       5’和3’RACE的PCR反应

               e）       PCR产物构建TA克隆

               f）       分别随机挑取10个克隆进行测序

       4）       对获取的序列进行验证以验证获取的5' RACE或3' RACE序列与已知序列是否连续存在于同一条cDNA片段上。

客户提供

         总RNA量大于10 mg，如果基因的丰度较低或者未知序列较长，请提供尽量多的实验材料。

         已知的参考序列长度≥200 bp。

我们提供

         构建好5’和3’RACE的TA克隆（含20%甘油的LB培养基）,装到PMD18-T载体上；测序图谱；实验报告

质量保证

         获取的5' RACE或3' RACE序列与已知序列连续存在于同一条cDNA片段上